核酸、核苷酸及衍生物都具有共軛雙鍵系統(tǒng), 能吸收紫外光, RNA、DNA 的紫外吸收高峰在260 nm 波長(zhǎng)處。***般在260 nm 波長(zhǎng)下, 每1 ml 含1 μg RNA 的溶液光吸收值為0.022 , 每1 ml 含1 μg DNA 的溶液光吸收值約為0.020 , 故測(cè)定未知濃度RNA 或DNA 溶液在260 nm 的光吸收值即可計(jì)算出其中核酸的含量。此法操作簡(jiǎn)便、迅速。若樣品內(nèi)混有大量的核苷酸或蛋白質(zhì)等能吸收紫外光的物質(zhì), 則測(cè)定誤差較大, 故應(yīng)該先除去。

實(shí)驗(yàn)材料：核酸

試劑、試劑盒：氨水 鉬酸銨-高氯酸試劑 蒸餾水

儀器、耗材：分析天平 離心機(jī) 容量瓶 紫外分光光度計(jì) 吸管 冰浴鍋

實(shí)驗(yàn)步驟：

1.用分析天平準(zhǔn)確稱(chēng)取待測(cè)的核酸樣品500 mg , 加入少量蒸餾水調(diào)成糊狀, 再加入少量的水稀釋。然后用5% ～6% 氨水調(diào)至pH7 , 定容到50 ml 。

2.取兩支離心管, 向第***只管內(nèi)加入2 ml 樣品液和2 ml 蒸餾水, 向第二只管內(nèi)加入2 ml 樣品液和2 ml 沉淀劑( 以除去大分子核酸) 作為對(duì)照。混勻, 在冰浴中放置30 min 后離心( 3000 r/ min) , 從第***、第二管中分別吸取0.5 ml 上清液, 用蒸餾水定容到50 ml。用光程為1 cm 的石英比色杯于260 nm 波長(zhǎng)處測(cè)其光吸收值( A1 和A2) 。

【結(jié)果處理】

DNA (RNA)% = [ (A1 - A2) / 0 . 020 (或0 . 022 ) ] (μg/ ml)×100/ 樣品濃度(μg/ ml ) 樣品濃度= 500 mg/ ( 50 ×4/ 2 ×50/0 . 5)  ml = 50 μg/ ml。